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    細胞培養常見問題原因分析及解決辦法
    發布日期:2018/3/30 12:35:11  /  發布人:AG厅生物  /  瀏覽:

    問題

    可能原因

    建議解決方法

    培養液pH值變化太快

     

    CO2張力不對。




    培養瓶蓋擰得太緊。


    NaHCO3緩衝係統緩衝力不足。


    培養液中鹽濃度不正確

     


    細菌、酵母或真菌汙染

    (1)按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度,2.0g/L 到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5% 到10%。

    (2)改用不依賴CO2培養液。


    鬆開瓶蓋1/4圈。


    加HEPES緩衝液至10到25mM終濃度。



    CO2培養環境中改用基於Earle′s 鹽配製的培養液,在大氣培養環境中培養改用Hanks鹽配製的培養液。


    丟棄培養物。或用抗生素除菌。

     

    培養液出現沉澱,但pH值不變

    用洗滌劑清洗後殘留磷酸鹽將培養基成分沉澱下來


    冰凍保存培養液

    用去離子水反複衝洗玻璃器皿,然後除菌。

     

    將培養液加熱到37℃,搖動使其溶解如沉澱仍然存在,丟棄培養液。

    培養液出現沉澱,同時pH發生變化

    細菌或真菌汙染

    丟棄培養物。或用抗生素除菌。

     

    培養細胞不貼壁

    胰蛋白酶消化過度

    支原體汙染

    培養液中無貼壁因子

    縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。

    分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體汙染,丟棄培養物。

    懸浮細胞成簇

    培養液中含鈣、鎂離子

     

    支原體汙染

     

    蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA

    用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞,輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。

    分離培養物,檢測支原體。如發現支原體汙染,丟棄培養物。


    DNase I處理細胞。

    原代細胞培養物汙染

    原代培養組織在進入培養前已汙染

    培養前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反複衝洗組織。

    培養細胞生長減慢

    由於更換不同培養液或血清

     

    培養液中一些細胞生長必需成分如穀氨酰***或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。


    培養物中有少量細菌或真菌汙染



    試劑保存不當

     

    接種細胞起始濃度太低

    細胞已老化

    支原體汙染

    比較新培養液與原培養液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。

    增加起始培養細胞濃度。

    讓細胞逐漸適應新培養液。

    換入新鮮配製培養液。

    補加穀氨酰***或生長因子。

    用無抗生素培養液培養,如發現汙染,丟棄培養物。或用抗生素除菌。


    血清需保存在-5 到-20℃。培養液需在2-8℃


    避光保存。含血清完全培養液在2-8℃保存,並在2周內用完。

    增加接種細胞起始濃度。

    換用新的保種細胞。

    分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體汙染,丟棄培養物。

    培養細胞死亡

    培養箱內無CO2

    培養箱內溫度波動太大


    細胞凍存或複蘇過程中損傷


    培養液滲透壓不正確

     

     

    培養液中有毒代謝產物堆積

    檢測培養箱內CO2

    檢查培養箱內溫度


    取新的保存細胞種


    檢測培養液滲透壓。注意:大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260  350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。


    換入新鮮培養液


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