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    合成培養液的基本成分介紹
    發布日期:2018/4/2 12:53:14  /  發布人:AG厅生物  /  瀏覽:

    合成培養基(液)基本成分有哪些?

    合成培養基的種類雖多,但一般均含有氨基酸、維生素、糖類、無機離子和一些其它的輔助性成分。

    1)氨基酸:是合成培養基的主要成分,合成培養基中以必需氨基酸為主。不同種類的細胞對氨基酸的要求也不同,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中穀氨酰***是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸,在缺少穀氨酰***時,細胞生長不良而死亡。

    2)維生素:細胞生長代謝中大多數的酶、輔酶是依靠維生素來形成的。在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來源, 但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞係生長。

    3)糖類:培養基中的碳水化合物包括葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙***酸鈉等,主要提供細胞生長的能量,也可參與合成蛋白質和核酸。

    4)無機離子:培養基含有平衡鹽溶液的鉀、鈉等無機鹽,有些培養基含有微量元素,如Fe2+、Zn2+、Ca2+等。

    5)其它成分:有時可在少數合成培養基中加入代謝的中間產物、氧化還原劑、三磷酸腺苷、輔酶A等。為適應某些特殊培養的需要可以補加一些新的成分,如雜交瘤技術中常用的DMEM培養液,使用時還需要補加丙***酸鈉和2-巰基乙醇。

    平衡鹽溶液

    平衡鹽溶液(BSS)是組織細胞培養中常用的基本液體。它可以維持滲透壓、調節pH值及供給細胞生存所需的能量和無機離子成分。主要作為合成培養基(液)的基礎液及用於洗滌組織、細胞等。常用的平衡鹽溶液有PBS、Hanks液(HBSS)與D-Hanks液等。各種平衡鹽溶液的主要區別在於***化鈉的濃度、離子的濃度及緩衝係統不同,可根據需要選用適當的平衡鹽溶液。

    消化液

    原代培養中欲分散組織、細胞時,傳代中欲使細胞脫離附著的底物時均需使用消化液。組織細胞培養中常用的消化液為胰蛋白酶、EDTA兩種溶液,使用時可以單獨使用或混合使用。

    胰蛋白酶是從動物胰髒分離的一種水解酶,其主要功能為使細胞間的蛋白質水解、細胞分散。胰蛋白酶分離細胞的能力與細胞種類及細胞的特性有關,不同種類的細胞以及不同數量的細胞采用胰蛋白酶消化的時間亦不相同。濃度大、溫度高、新配製的胰蛋白酶可使細胞分離速度增快。胰蛋白酶溶液在pH8.0,溫度為37℃時,作用能力最強。


    注意:鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會降低胰蛋白酶活力。消化細胞時,加入一些血清或含血清的培養液,或胰蛋白酶抑製劑能終止胰蛋白酶對細胞的消化作用。


    保存條件:配製好的胰蛋白酶溶液必須保存在-20℃冰箱中,以免分解失效。

    請在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。


    EDTA是一種化學螯合劑,主要作用為能螯合Ca2+、Mg2+,使細胞分離,對細胞毒性小。常用的濃度為0.02%。

    胰蛋白酶和EDTA聯合使用可提高消化效率,但需注意EDTA不能被血清中和,使用EDTA處理細胞後,一定要用Hanks液衝洗幹淨,因殘留的EDTA會影響細胞生長。


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