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    細胞培養汙染鑒定
    發布日期:2019/8/1 16:59:58  /  發布人:AG厅生物  /  瀏覽:
    細胞株的汙染鑒定、預防和處理問題。 普通微生物汙染:培養基渾濁,高倍鏡觀察有微生物汙染;按規定棄用並全麵嚴格滅菌。 支原體汙染:顯微鏡無法觀察,依經驗表現為細胞生長緩慢,有細胞漂浮等等,應通過PCR 等方法鑒定,如發現支原體汙染,應按規定棄用,實驗室要及時全麵消毒滅菌,防止蔓延。 (有些常規性細胞學實驗不受支原體汙染影響,可以繼續使用細胞傳代,為防汙染擴大蔓延,可以選擇性的在培養基中加入高效價的其它種抗生素,並在隔離實驗室操作和獨立使用一切用具與培養基等)。 支原體汙染及檢測: (1)支原體汙染在細胞培養中最常見、不易被查覺,但支原體汙染可顯著影響細胞功能幹擾實驗結果。支原體是介於細菌和病毒之間的目前所知能獨立生活的最小微生物,它無細胞壁,形態呈高度多形性,最小直徑0.2um,可通過濾器。 目前通過對國內100餘株/係細胞的檢測,形勢不容樂觀。汙染率達30% ~ 60% 。課題組從國外引進細胞株/係也經常出現支原體的汙染。支原體在汙染細胞後,它通過影響細胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培養基中的氨基酸來抑製細胞的生長,並能降低細胞的融合率。因此,在運用各種細胞係進行實驗研究時,首先要證明所用細胞有無支原體的汙染。 (2)支原體汙染後,培養基可不發生渾濁,細胞病變輕微或不明顯,因此難以發現。目前,支原體檢測的方法有以下幾種。 (a)相差顯微鏡觀察; (b)低張處理地衣紅染色法; (c)熒光染色法; (d)酶標法; (e)PCR法:使用該方法進行檢測。 優點:靈敏度高,檢測耗時短,樣品量小 (隻需50ul細胞培養用液上清)。 缺點:引物及製劑費用較高。
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